PCRで増えない

先日PCRで目的遺伝子が増えなくて悩んだ。

そういう時に考えられることって大体primerの設計ミスであることが（私には）多いのだけれど、今回はそうじゃなかったので覚え書き。

原因はTm値だった。今までは注文して届いたprimerの情報に書いてあるTm値の数字をそのままアニーリング温度としてPCR条件を組んでいたけど、Tm値−5℃が一般的と知った。

そこでアニーリング温度を下げたら、ちゃんと増えた。

学生時代は問題が起こっても相談できる先輩がいたけど、今はいないわけで、一人でもトラブル解決できるようにもっと基本的な作業の原理を理解しておかないと思わされた。